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    超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)

    型 號

    產(chǎn)品時(shí)間2024-11-22

    所屬分類氧化磷酸化系列

    報(bào)價(jià)700

    產(chǎn)品描述:超氧化物歧化酶(SOD)生化檢測試劑盒(WST8法)SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成H2O2和O2。

    產(chǎn)品概述

    商品屬性:

    產(chǎn)品名稱:超氧化物歧化酶(SOD)生化檢測試劑盒(WST8)

    規(guī)格:100/96  

    貨號 : EY-01S146

    測試方法:微量法   

    分類:氧化與抗氧化系列

    商品詳情:

    測定意義:

     SODEC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成H2O2O2SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

    測定原理:

    通過及氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)O2-可與WST-8反應(yīng)產(chǎn)生水溶性染料甲臜,后者在450nm處有吸收;SOD可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液黃色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。

    需自備的儀器和用品:

    酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

     

    粗酶液提取:

    1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

    2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

    3、血清等液體:直接測定。


    5.png




    ADH測定操作:

    1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

    2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

    3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。

    測定步驟:

    1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

    2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

    3、操作表:

    試劑名稱μL

    測定孔

    樣本

    20

    試劑二

    760

    試劑三

    10

    試劑四

    10


    將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

    注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

    NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

    1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

    單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

    2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

    (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

    單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

    超氧化物歧化酶(SOD)生化檢測試劑盒(WST8)(2)按樣本鮮重計(jì)算:

    單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

    (3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

    單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

    V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬。

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