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背景：

細(xì)胞凋亡（apoptosis）是一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。在正常活細(xì)胞中，磷脂酰絲（PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。膜聯(lián)蛋白V(Annexin V) 是一種分子量為35~36KDa的鈣離子依賴型磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。通過熒光素或者標(biāo)記Annexin V即可簡單快速地直接檢測出細(xì)胞早期凋亡情況。 碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，而早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完好的，對PI有拒染性。但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染上。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。PI可以被488,532或546nm激光線激發(fā)，并發(fā)出紅色熒光。

標(biāo)記：

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。

3.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細(xì)胞以 104-105 個細(xì)胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CRF (Corticotropin-Releasing Factor 0.5mgCRF (Corticotropin-Releasing Factor) 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子

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小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA 試劑盒

Human fetal hemoglobin (HBF) ELISA Kit 人胎兒血紅蛋白(HBF)檢測試劑盒

HumanHerpessimplexvirus2,HSV-Ag2ELISAKit 人單皰疹病毒抗原2(HSV-Ag2)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanarylhydrocarboeceptor,AhR檢測試劑盒人芳香烴受體(AhR)檢測試劑盒

植物源性食品芥末(mustard)試劑盒20次

Humahymosinα1ELISAKit人肽α1(Thymosinα1)檢測試劑盒

無形體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

東方體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

人皰疹病毒6型(HHV-6)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

(OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Annexin V-EGFP/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒GREM1重組小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

蛋白酶激活受體4(PAR4)重組蛋白 Recombinant Protease Activated Receptor 4 (PAR4)

CFL1重組人 CFL1 / N-cofilin 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FETUB Protein Human 重組人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TNFRSF10D Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠β細(xì)胞素(BTC)檢測試劑盒 ，英文名： BTC ELISA Kit

Mouse esadiol receptor (ER) ELISA Kit 小鼠雌二醇受體(ER)檢測試劑盒

ELISA 小鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65(mouse NF-kBp65)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-15ELISAKIT大鼠白介素15

通用型馬萊姆癥嗜吞噬細(xì)胞無形體(LymeandAnaplasmaPhagocytophilum)試劑盒20次

ELISAKitANG-R-Tie1大鼠血管生成素受體Tie1