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    結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)生化檢測(cè)試劑盒

    型 號(hào)

    產(chǎn)品時(shí)間2024-11-23

    所屬分類脂肪酸代謝系列

    報(bào)價(jià)300

    產(chǎn)品描述:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)生化檢測(cè)試劑盒GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。

    產(chǎn)品概述

    商品屬性:

    產(chǎn)品名稱:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)生化檢測(cè)試劑盒

    規(guī)格:100/96 50/48 25/24

    貨號(hào) : EY-01S1210

    測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法 紫外分光光度法 

    分類:脂肪酸代謝系列

    商品詳情:

    測(cè)定意義

    GBSSEC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。

    測(cè)定原理

    GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時(shí)生成ADP;進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測(cè)定NADPH的增加量,可以計(jì)算GBSS活性。

    需自備的的儀器和用品

    紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

    粗酶液提取:

    1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。

    2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測(cè)。

    3、血清等液體:直接測(cè)定。


    5.png



    ADH測(cè)定操作:

    1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

    2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

    3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測(cè)定管=A1-A2。

    測(cè)定步驟:

    1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

    2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

    3、操作表:

    試劑名稱μL

    測(cè)定孔

    樣本

    20

    試劑二

    760

    試劑三

    10

    試劑四

    10


    將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

    注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

    NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

    1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

    單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

    2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

    (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

    單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

    (2)按樣本鮮重計(jì)算:

    單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

    (3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

    單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

    V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬。

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