商品屬性：

產(chǎn)品名稱：中性木聚糖酶生化檢測試劑盒/中性半纖維素酶生化檢測試劑盒

規(guī)格：100管/48樣 50管/24樣 

貨號 : EY-01S1247

測試方法:微量法　可見分光光度法　　

分類：糖代謝系列

商品詳情：

測定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX一般分離自最適生長pH為6-8的微生物。

測定原理：

NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計算NEX活力。

自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

ADH測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

3、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH活力單位的計算：

1、血清（漿）NAD-MDH活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000萬。

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