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    果膠甲酯化程度生化檢測試劑盒

    型 號

    產品時間2024-11-21

    所屬分類果膠系列

    報價300

    產品描述:果膠甲酯化程度生化檢測試劑盒植物細胞壁中的果膠是植物初生細胞壁的主要成分,除了起結構支撐、物質運輸等作用外,還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細胞壁的堅韌程度及其抗性。

    產品概述

    商品屬性:

    產品名稱

    規(guī)格

    貨號

    果膠甲酯化程度生化檢測試劑盒

    100/96 50/48   

    EY-01S1399

     

    商品詳情:

    測定意義

    植物細胞壁中的果膠是植物初生細胞壁的主要成分,除了起結構支撐、物質運輸等作用外,還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細胞壁的堅韌程度及其抗性。

    測定原理

    果膠甲酯鍵經皂化處理后釋放出甲醇,甲醇與2,4-戊二酮反應顯色,在412nm下測定吸光值;同時半乳糖醛酸在70℃下與濃硫酸反應生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸,5-甲酰基-2-呋喃甲酸與3,5-二甲基反應產生有色物質,在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。

    自備實驗用品及儀器

    天平、低溫離心機、酶標儀、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。

    5.png



    ADH測定操作:

    1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調零。

    2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

    3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測定管=A1-A2。

    測定步驟:

    1、分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至340nm,蒸餾水調零。

    2、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

    3、操作表:

    試劑名稱μL

    測定孔

    樣本

    20

    試劑二

    760

    試劑三

    10

    試劑四

    10


    將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。

    注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

    NAD-MDH活力單位的計算:

    1、血清(漿)NAD-MDH活力的計算

    單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

    2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

    (1)按樣本蛋白濃度計算:

    單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

    (2)按樣本鮮重計算:

    單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

    (3)按細菌或細胞密度計算:

    單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

    NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

    V反總:反應體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;2000:細胞或細菌總數,2000萬。

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