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    質粒轉化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法

    點擊次數:3767  更新時間:2015-09-18

        介紹一種質粒轉化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。

        背景:目前外源質粒轉化大腸桿菌的步驟,需要先將質粒和感受態細胞在冰上撫育半小時,然后42度熱激90秒,加液體培養基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴格,熱激后大量菌細胞死亡,還要經過液體培養基撫育才能涂板。

       方法改進:我們可以在做質粒和感受態細胞在冰上撫育的同時,將要涂的平板放在37度培養箱里,當撫育結束后,立即涂到已經加熱到37度的平板上,利用培養板的熱度代替熱激,平板可以直接放回培養箱倒置培養。由于溫度相對溫和,細胞死亡的少,之后的液體培養基撫育過程也省掉了。

        這個方法我們一直在用,質粒可以成功轉進菌體中,只要感受態細胞沒有問題,其轉化率和使用熱激法差不多,而且若是新鮮制備的感受態細胞,轉化率甚至更高。可以省下42度水浴裝置的儀器,還節省了至少1個小時的時間。

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