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    冰凍切片

    點(diǎn)擊次數(shù):1491  更新時(shí)間:2015-07-15


    ?  冰凍切片是指將組織在冷凍狀態(tài)下直接切片。
    ?  在切片前組織不經(jīng)過任何化學(xué)藥品處理或加熱過程。
    –  縮短了制片時(shí)間
    –  抗原性不受損失
    ?  對(duì)穩(wěn)定性差的抗原,如淋巴細(xì)胞表面抗原尤其適合。

    ?  組織凍結(jié)過程中,細(xì)胞內(nèi)、外的水分會(huì)形成冰晶,凍結(jié)的速度愈慢,冰晶顆粒愈大,可嚴(yán)重影響組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此制備凍塊時(shí)要求低溫、速凍。

    1、冰凍組織塊的常用方法
    ?  液氮中冰凍:組織投入液氮中 (一196?C)中10~20sec;
    ?  干冰中加入丙酮(或異戊烷),液體立即氣化起泡,溫度降至一70?C ,將組織投入,若在干冰丙酮中置一盛有異戊烷的容器,組織投入該容器內(nèi)結(jié)凍則更好;
    –  上述組織在速凍時(shí)應(yīng)浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內(nèi),以保護(hù)組織。
    –  制成凍塊后若需保存,應(yīng)以鋁箔或塑料薄膜封包,貯存于-70 ?C冰箱。

    2、切片
    ?  供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整,并有連續(xù)性。
    ?  載玻片也應(yīng)清潔無油污,但一般無需涂抹粘附劑;
    ?  切片時(shí),使用恒溫冷凍切片機(jī),在箱內(nèi)溫度-25 ?C 。切片厚度一般為4~8?m。

    3、切片后處理
    ?  切好的冰凍切片,室溫下自然晾干1~2h后,入4?C丙酮固定10min,待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃。細(xì)胞
    ?  由于切片技術(shù)要求較高,不易得到連續(xù)性很好的切片,其形態(tài)結(jié)構(gòu)亦不如石蠟片,且凍塊和切片不便于長期貯存,因此的應(yīng)用受限。

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