技術文章/ARTICLES

1、儀器質控
 為使儀器保持*工作狀態，應建立維護和校正儀器的標準操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機和酶標儀。
◎移液器： ELISA試劑盒加樣量小（20-200μl），其準確性直接影響實驗結果，利用稱重法檢查：低、中、高三個刻度分別吸取指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確，一般應在±5%以內；
◎恒溫箱： 經常檢查恒溫箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內）實測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；
◎洗板機： 每個設置洗板后的殘留液有各自的規定，一般不超過2μl；人工扣板時，墊紙不濕；定期檢查管孔是否堵塞；
◎酶標儀：經常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。

2、試劑盒選擇
◎應盡量選擇正規，產品經相應政府部門審核認可，試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。
◎靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力；2）為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。
   ◎特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應，使測定結果升   高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。
   ◎精密度：ELISA試劑盒一般指其批內CV%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍。
   ◎準確度：通過添加回收實驗進行評價。
   ◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結果判斷簡單明了，定量試驗結果計算也應簡單。
   ◎安全性：指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性。
   ◎經濟性：試劑在同等質量條件下通過大規模或技術進步降低成本，而市場價格比較合理。
   ◎試劑評價：需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。

3、樣本前處理注意事項
3.1 均質
組織樣本:肉、肝食品類切細，用絞肉機反復絞碎，混合均勻。
水產樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細，用均質器均漿；原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。
蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。
水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。
3.2 振蕩提取
 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組織內部，提取待測組分。
3.2.1振蕩方式：振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
3.2.2 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時，應邊加邊振蕩，防止組織凝結成團，不利于提取。
3.3. 在用有機溶劑提取過程中，如果出現乳化現象，解決的方法有：①用細頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數不變。
3.4 濃縮
    由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式：
    ELISA試劑盒氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
注意：
3.4.1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質干擾。
3.4.2在吹樣本時，針頭應在液面上空，避免與樣本接觸，防止產生交叉污染。
3.4.3樣本吹干后應立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結果。
3.4.4不同的藥物，吹干后樣本的保質期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復溶。