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    分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種方法

    點(diǎn)擊次數(shù):1320  更新時(shí)間:2017-01-19

    分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種方法

    本技術(shù)方案采用了一種分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的方法,包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭后,用燒灼的刀具從菌柄頂端在

    火焰上方切割掉子實(shí)體頭部,露出的新鮮菌柄橫切面,在火焰上輕快過2-4下,用刀具在新鮮菌柄內(nèi)側(cè)環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織并送入抗生素平板培養(yǎng)荃上,于20-30℃的溫度下培養(yǎng),待萌發(fā)出菌絲后,及時(shí)轉(zhuǎn)接。

    費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實(shí)體在切割前要基部菌柄完整,用透明膠把費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌整個(gè)纏繞密封,中間不留空隙。

    所述的抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀lg,硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g,瓊脂20g、水1000mL,鏈霉素30U/mL,青霉素30U/mL, pH6.5

    所述抗生素平板培養(yǎng)基的制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min,過濾取2000mL,加入草炭,小火浸煮20min,過濾取濾液1000mL,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂,小火煮至瓊脂溶解,定容至1000mL,分裝于三角瓶,在高溫121℃-126'C,高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉、硫酸鏈霉素復(fù)合抗生素母液,使抗生素終濃度在30U/ml.左右,將配好的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中或直接冷卻成固體培養(yǎng)基。

    本技術(shù)的分離方法,先是對(duì)費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌進(jìn)行封閉式消毒,防止消毒酒精浸入菌組織,有利分離成功。另外,割掉子實(shí)體頭部后,露出的菌柄內(nèi)側(cè)為無菌組織,環(huán)割取內(nèi)側(cè)菌肉組織防雜效果較好。采用抗生素培養(yǎng)基也有利于防止雜菌污染,培養(yǎng)基的組分營養(yǎng)非常全面,特別是加入草炭和酵母膏,為費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌絲生長提供了保證。本發(fā)明的整個(gè)操作過程不用消毒液,全用火焰消毒,萌發(fā)率較高,既保證了容易萌發(fā),同時(shí)也能降低污染,并能較順利的分離到費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種。

    本實(shí)施例的分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種的方法,包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%
    消毒酒精均勻擦拭后,用燒灼的手術(shù)刀片從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實(shí)體頭部,露出的新鮮菌柄橫切面,在火焰上輕快過兩下。用手術(shù)刀在新鮮菌柄內(nèi)側(cè)環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織送入抗生素平板培養(yǎng)基上,25℃培養(yǎng),待萌發(fā)出菌絲后,及時(shí)轉(zhuǎn)接。抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀lg,硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g,瓊脂20g、水1000mL,鏈霉素30U/mL,青霉素30U/mL, pH6.5,其制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min,過濾取2000mL,加入草炭,小火浸煮20min,過濾取濾液I000ml,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂,小火煮至瓊脂溶解,定容至1000mL,分裝于三角瓶,在高溫121℃-126℃、高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。

    待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉、硫酸鏈霉素復(fù)合抗生素母液,使抗生素終濃度在30U/mL左右,將配好的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中或直接冷卻成固體培養(yǎng)基。其中,費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實(shí)體在切割前要基部菌柄完整,用透明膠把費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌整個(gè)纏繞密封,中間不留空隙。

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